無錫市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀供應(yīng)商
發(fā)布時(shí)間:2025-06-15 00:55:01
無錫市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀供應(yīng)商
分子診斷的主要技術(shù)有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)和生物芯片技術(shù)。1.核酸分子雜交技術(shù) 具有一定互補(bǔ)序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則締合成異質(zhì)雙鏈的過程,稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測(cè)核酸序列和探針序列。應(yīng)用該技術(shù)可對(duì)特定DNA或RNA序列進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。2.聚合酶鏈反應(yīng)(即Polymerase chain reaction,PCR)原理:PCR是模板DNA,引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸(dNTP)在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應(yīng),擴(kuò)增出所需目的DNA。包括三個(gè)基本步驟:雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈(變性);在低溫下引物與單鏈DNA互補(bǔ)配對(duì)(退火);在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。3.生物芯片技術(shù)是近年發(fā)展起來的分子生物學(xué)與微電子技術(shù)相結(jié)合的核酸分析檢測(cè)技術(shù)。起初的生物芯片技術(shù)主要目標(biāo)是用于DNA序列測(cè)定、基因表達(dá)譜鑒定和基因突變體檢測(cè)和分析,所以又稱為DNA芯片或基因芯片技術(shù)。由于這一技術(shù)已擴(kuò)展至免疫反應(yīng)、受體結(jié)合等非核酸領(lǐng)域,出現(xiàn)了蛋白質(zhì)芯片、免疫芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片等,所以改稱生物芯片技術(shù)更符合發(fā)展趨勢(shì)。

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相對(duì)分子質(zhì)量為94的Taq DNA聚合酶的活性較高,大約為200000 U/mg,在合成DNA時(shí)有一個(gè)較高的適溫度75~80℃。Taq DNA聚合酶雖然在90℃以上合成DNA的能力有限,但高溫時(shí)仍比較穩(wěn)定。有實(shí)驗(yàn)證明,在92.5℃、95℃和97.5℃時(shí),PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分別經(jīng)130 min、40 min和5~6 min后,仍可保持百分之50左右的活性,其半衰期較長(zhǎng)。所以,在一個(gè)PCR預(yù)備試驗(yàn)中,每次循環(huán)時(shí)上限溫度為95℃處理20S,則循環(huán)50次后Taq DNA聚合酶仍可保持百分之65的活性,能夠保證實(shí)驗(yàn)的需要。

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分子診斷儀器主要包括核酸提取儀、PCR 擴(kuò)增儀、核酸分子雜交儀、基因芯片儀和基因測(cè)序儀等。在技術(shù)相對(duì)容易攻破的中端儀器領(lǐng)域,如核酸提取儀、PCR 擴(kuò)增儀、核酸分子雜交儀、基因芯片儀國(guó)產(chǎn)化已經(jīng)成型,國(guó)產(chǎn)產(chǎn)品占據(jù)了主要市場(chǎng),而 基因測(cè)序儀的國(guó)產(chǎn)化進(jìn)程正在發(fā)起突圍,主要表現(xiàn)為三種方式: (1)并購(gòu)國(guó)外的測(cè)序儀公司,在其核心技術(shù)的基礎(chǔ)上推出自主品牌的測(cè)序儀,以華大基因?yàn)榇?。?)利用內(nèi)生科研能力自主研發(fā),以華因康基因、紫鑫藥業(yè)等公司為代表。(3)與國(guó)外知名測(cè)序儀生產(chǎn)企業(yè)合作,在其測(cè)序儀原型的基礎(chǔ)上加以改造,形成具有特殊用途的自主品牌的測(cè)序儀,代表公司是貝瑞和康、達(dá)安基因和博奧生物等。

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熱啟動(dòng)PCR(hot start PCR)是指使Taq DNA 聚合酶只有在樣品溫度至少超過70℃時(shí)才發(fā)揮作用的PCR,可提高反應(yīng)的特異性。Taq DNA 聚合酶通常在比適宜溫度低得多的條件下仍有較強(qiáng)的活性。PCR 反應(yīng)的初加熱過程中,樣品溫度上升到70℃之前,在較低的溫度下引物可能與部分單鏈模板形成非特異性結(jié)合,并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。結(jié)果會(huì)導(dǎo)致非靶序列的擴(kuò)增,影響反應(yīng)的特異性。熱啟動(dòng)可減少非靶序列的擴(kuò)增,提高反應(yīng)的特異性。在引物設(shè)計(jì)時(shí)如果某位點(diǎn)因?yàn)檫z傳元件的定位而受限,如site-directed 突變、表達(dá)克隆或用于DNA 工程的遺傳元件的構(gòu)建和操作等情況,熱啟動(dòng)PCR 尤為有效。

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傳染病的有關(guān)概念傳染:傳染是在- -定的外界條件下,動(dòng)物機(jī)體與侵入體內(nèi)的病原微生物相互斗爭(zhēng)所表現(xiàn)的不同程度的感受過程。病原微生物在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)一定部位定居、繁殖,引起機(jī)體產(chǎn)生- - 系列病理反應(yīng)的過程。呈現(xiàn)出一- 定的臨床癥狀的傳染稱為顯性傳染。反之,如果動(dòng)物不顯臨床癥狀,稱為隱性傳染。傳染病:凡是由病原微生物引起,具有--定的潛伏期和臨床表現(xiàn),并具有傳染性的疾病稱為傳染病。敗血癥:病原體在機(jī)體的局部感染后,不斷繁殖并進(jìn)人血液,在f血液中繼續(xù)繁殖,產(chǎn)生毒素,引起各實(shí)質(zhì)器官的嚴(yán)重病變與全身反應(yīng)的綜合征。